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    大腸桿菌O157:H7的檢驗

    放大字體  縮小字體 發布日期:2010-09-01  瀏覽次數:9063
    核心提示:出血性大腸桿菌O157:H7介紹 1、培養基制備:  改良EC新生霉素增菌肉湯 (mEC): EC肉湯滅菌后添加20mg/mL過濾除菌的新生

    出血性大腸桿菌O157:H7介紹

    1、培養基制備:

      改良EC新生霉素增菌肉湯 (mEC) EC肉湯滅菌后添加20mg/mL過濾除菌的新生霉素,使終濃度為20μg/mL。

      改良山梨醇麥康凱瓊脂(TC-SMAC):山梨醇麥康凱瓊脂加入過濾除菌的1%亞碲酸鉀溶液,使終濃度2.5mg/L,頭孢克污,使終濃度為0.05mg/L。
    MUG-LST肉湯:LST肉湯中添加4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷(MUG),使終濃度為0.1g/L。

    2、增菌培養

      秤取25克樣品放入225mL mEC中,均質。于41±1℃培養18-24小時。

    3、分離

      將mEC肉湯培養物10倍遞增稀釋。從10-4,10-5,10-6稀釋度,各取0.1mL涂布于TC-SMAC平板。于36±1℃培養18~24小時。

      可疑 EHEC O157:H7菌落扁平,透明或半透明,邊緣光滑,呈淡褐色中心,直徑約2mm。

      附:在梅里埃公司改良山梨醇麥康凱瓊脂上的菌落。

    4、鑒定

      挑取TC-SMAC上的可疑菌落,接種MUG-LST,于36±1℃培養18~24小時,出現產氣,且無熒光者,分離到普通營養瓊脂。

      對純菌落用EHEC O157:H7標準血清或膠乳凝集試劑作凝集試驗,必要時進行生化試驗。

      在檢測過程中,也可以在選擇性增菌后,取出5mL增菌液,經100℃水浴15分鐘滅活后,供自動酶聯熒光免疫測試(VIDAS),迅速獲得初步結果,陽性反應者需作進一步證實。

      附:自動酶聯熒光免疫測試(mini-VIDAS)

        自動酶聯熒光免疫測試(VIDAS)測定程序

    •   EHEC O157:H7檢驗程序圖解

    檢樣25g

          mEC225mL → VIDAS快速篩選

      ↓41±1℃,18-24h

    10-4,10-5,10-6稀釋度涂布TC-SMAC

    ↓36±1℃,18-24h

    挑取5-10個可疑菌落接種MUG-LST

    ↓36±1℃,18-24h

    MUG陰性培養物轉種普通營養瓊脂

    ↓     ↓

    生化反應鑒定    血清凝集鑒定

           或

             膠乳凝集試驗

      用上述方法在樣品中分離獲得的純菌落,經抗E.coli O157:H7標準血清或EHEC O157:H7膠乳凝集測試為陽性者,報告檢出腸出血性大腸桿菌O157:H7。

      如需要進一步檢測Vero毒素基因的存在,可通過接種Vero細胞或Hela細胞,觀察細胞病變進行判定,或可使用基因探針檢測和聚合酶鏈反應(PCR)檢測法。(參見FDA細菌分析手冊第8版)

    編輯:foodadmin

     
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    關鍵詞: 大腸桿菌
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